Анализа

Распространенность» алкоголизма вызыват серьезную озабоченность во всем мире. Сплошное обследование, проведенное в Канаде, показало, что у 5—1 О <Х> Обследованных диагностируется алкоголизм, а 15 — ЗО пациентов клиник различного профиля злоупотребляют алкоголем [13]. По данным 1997 г., в нашей стране 28,5 <> пациентов, поступающих в терапевтические отделения, могут быть отнесены к категории регуляр­ных потребителей алкоголя в опасных для здоровья дозах, причем хрони­ческой алкогольной интоксикации подвергает себя каждый второй муж­чина и каждая седьмая женщина [6]. Этим объясняется повышенный интерес исследователей в различных странах к поиску маркеров для объек­тивного выявления хронической алкогольной интоксикации. Однако накопившаяся к настоящему времени информация кажется мало утепли­тельной; диагностические тесты, основанные на выявлении тех или иных физиологических параметров, обладают или низкой чувствительностью, или низкой специфичностью, либо они технически очень сложны и трудо- емки, либо основываются на показателях, которые нормализуются уже через несколько часов после приема алкоголя [11]. Вместе с тем известно, что ацетальдегид, являющийся продуктом пер­вичного метаболизма этанола, активно взаимодействует в организме с мо­лекулами белков, изменяя их структуру. В результате этого в организме начинают синтезироваться антитела к модифицированным ацетальдеги­дом белкам.

Ацетальдегид обнаруживается в крови и тканях у здоровых людей [7], но у лиц, хронически злоупотребляющих спиртными напитками, концен­трация ацетальдегида в организме значительно возрастает и, следователь­но, увеличивается концентрация модифицированных им белков. Естествен­но, что в этом случае уровень антител к структурам, образующимся в результате взаимодействия белков с ацетальдегидом, также повышается.

Поэтому антитела к м од и ф и ци рованным ацетальдегидом белкам можно рассматривать в качестве возможных маркеров для выявления хроничес­кой алкогольной интоксикации. При проведении иммунодиагностики хронической алкогольной инток­сикации в качестве антигенов используются так называемые ацетальдегид-ные аддукты ( асе t aldehyde adducts), получаемые в системе in vitro и пред­став ля ющие собой конъюгаты ацетальдегида с такими белковыми молекулами, как альбумин, гемоглобин, миоглобин и т. п.

Так, Horner М. и соавт. [8, 9] показали, что у больных алкоголизмом антитела к модифици­рованному а це т ал ьд е гид о м гемоцианину моллюска keyhole limpet, выявля­емые с помощью реакции пассивной гемагглютинации, регистрируются в более высоких титрах, чем у людей, умеренно пьющих.

Niemela О. и соавт. [ 1 2] в качестве маркера хронической алкогольной интоксикации использо­вали антитела к гемоглобиновому ацетальдегид ному аддукту, выявляемые с помощью иммуноферментного анализа.

Они показали, что диагностически значимые титры специфических антител регистрируются у 46 больных алкоголизмом и у 24 <о обследованных, не злоупотребляющих спиртными напитками. Диагностические параметры иммуноферментного анализа уда­валось значительно повысить в том случае, когда в качестве маркеров алко­гольной интоксикации были использованы иммуноглобулины класса А, специфически направленные против конъюгата гемоглобина с ацетальдеги­дом. Антитела в титрах, свидетельствующих о злоупотреблении алкого­лем, были обнаружены у 77,3 больных алкоголизмом и только у 6,1 <//о умеренно пьющих людей [ 1 5].

Диагностическое значение иммуноглобули­нов класса А для выявления хронической алкогольной интоксикации отме­чалось также и другими исследователями [3, 4]. Вместе с тем, необходимо учитывать, что конъюгаты белков с ацеталь­дегидом антигенно неоднородны. Из литературы известно, что удельный вес м од и ф и ци ро в а н н о го ацетальдегидом белка колеблется в пределах 50—60 /<o [9,15] и, следовательно, о ставил нес я 40— 50 <> взятого для конъ­югации с ацетальдегидом белка не претерпевают никаких изменений.

Та­ким образом, используемые для исследования антигены представляют со­бой смесь модифицированного ацетальдегидом и нем од и ф и ци ро в а н н о го белка и способны выявлять два типа антител: антитела к структурноизме-ненным белкам и антитела к неизмененным нативным белкам. Поэтому наличие различных заболеваний, с о п р о в о ж да ю щи хс я активизацией ау­тоиммунных процессов и накоплением аутоантител, не может не от­разиться на результатах проводимого обследования.

В частности, было показано [5], что у больных с нарушениями функций сердца, печени и иммунной системы, с о п р о в о ж да ю од и м и с я аллергическими и аутоиммун­ными реакциями, а также у больных опийной наркоманией антитела к альбумину, модифицированному ацетальдегидом, регистрировались в тех же титрах, что и у больных алкоголизмом. Однако при более детальном анализе оказалось, что выя в л я е м о е увеличение титров специфических антител объясняется повышением у обследованных уровня аутоантител, в данном случае антител к сывороточному альбумину. Из вышеизложенного следует, что основная задача при иммунодиаг­ностике хронической алкогольной интоксикации сводится к тому, чтобы дифференцировать антитела к белкам, м од и ф и ци рованным ацетальдеги­дом, и антитела к неизмененным белкам, являющимся, как правило, ауто-антигенами.

ОПИСАНИЕ МЕТОДА

Реактивы. Сывороточный альбумин человека; ацетальдегид; бор гид­рид натрия; антитела против иммуноглобулинов человека класса А, ме­ченные пероксидазой хрена; ортофенилендиамин; соли для приготовле­ния буферных растворов. Оборудование. Стандартное. А. ы т и г е н ж»ж. При выявлении в и сел еду е м ых сыворотках с помощью иммуноферментного анализа и м м у н о г л о б у л и н о в класса А в качестве а н т и ге нов и с по л ьзу ют оч ище н н ы й препарат сывороточно го альбуми­на человека коммерческого производства (ЧСА) и конъюгат этого белка с ацетал ьде гидом (ЧСА-А), полученный в системе in vitro п о методу, описанному Trudell J. R.

и с о а в т. [14]. Концентрацию модифицированного белка определяют по его белковой части мето-дом Lowry О.

П. с соавт.

[ 1 О] .

Похожие записи:

Категории: