Диагностические возможности иммуноферментного анализа

С помощью иммуноферментного анализа были обследованы следую­щие группы лиц: • Доноры крови - умеренно пьющие люди (71 чел.). • «Лица, не употребляв плие алкоголь как минимум в течение одного месяца («отрицательный» контроль) (Ючел.). • Больные алкоголизмом (119 чел.). - Больные опийной наркоманией (49 чел.

). Больные алкоголизмом во II—Ш-ей стадии заболевания, проходили курс лечения в клинике НИИ наркологии Минздрава 1Р<Ж>. Всего обследовано 7 женщин и 112 мужчин в возрасте от 2 1 до 68 лет (средний возраст 42 ± 1 год). Суточная толерантность к алкоголю - 0,25 — 2,0 л водки (в среднем 1 ,0 ± 0,04 л); длительность алкогольной интоксикации от двух с половиной до 38 лет (в среднем 16 с половиной лет ± 9 месяцев); давность существования алкогольного абстинентного синдрома от года до ЗО лет (в среднем 9 с половиной лет ± полгода).

У 56 больных алкоголизмом (47 <> ) был диагностирован жировой ге-патоз, 6 человек (5 У> ) страдали алкогольным поражением сердца, у 15 (13 /<о) - обнаружены оба этих заболевания, у 13 (11 ) - выявлен алкогольный гепатит (хронический или острый), а у 8 (7 ) печень была увеличена на 1—4 см. Кроме перечисленных патологических состояний у больных диагностировались также алкогольные гастрит и колит, алко­гольная невропатия, алкогольная гипертония, токсическая энцефалопа­тия, а также нарушения л и пи дн ого обмена и повторные черепно-мозго­вые травмы.

Только 15 человек (13 ) не имели выраженных патологи­ческих изменений, напрямую связанных со злоупотреблением алкоголем. Биохимическое исследование крови показало, что концентрация хо­лестерина у больных алкоголизмом колеблется в пределах 3,2—1 0,9 ммоль/л (средний показатель 5,8 ± О, 1 при норме 3,2 — 6,5 ммоль / л); р-липопротеиды обнаруживались в концентрации 1 8— 1 76 ед. (в среднем 44,7 ±2,1 при норме 35—55 ед.

); концентрация би­лирубина в крови составляла 8,2— 52,1 ммоль/л (в среднем 16,9 ± 0,7 при норме 6, 1 —20,5 ммоль/л); значения тимоловой пробы колебались в пре­делах 0,2 — 8,8 (среднее значение 1,9 ± 0,1 при норме 1—5); активность аланинаминотрансферазы колебалась от 22 до 340 ед. (в среднем 78,5 ± 5,6 при норме до 38 ед. ); активность аспартатаминотрансферазы соответствовала 18—384 ед.

(в среднем 89,2 ± 5,3 при норме до 40 ед.). Известно, что у лиц, злоупотребляющих спиртными напитками, не­редко обнаруживаются нарушения функции печени, иммунной системы и кардиомиопатия. Однако информация о влиянии этих нарушений на уро - вень антител к: белкам, структурно измененным под воздействием аце-тальдегида, отсутствует.

Поэтому, наряду с уже перечисленными выше кон тин ген там и, нами были обследованы также: • Больные вирусным гепатитом В или (и) С (23 чел.). • Лица с заболеванием печени и желчевыводящих путей (ЖВП) неин-фекционного генеза (11 чел. ). • Больные, проходившие курс реабилитации после инфаркта миокар­да (35 чел.

). • Больные с аллергическими и аутоиммунными расстройствами (23 чел. ). С помощью иммуноферментного анализа в сыворотках крови обследо­ванных лиц выявляли иммуноглобулины класса А к белкам, структурно измененным под воздействием ацетальдегида. Титры исследуемых сыво­роток крови выражали в - log2.

Статистическую обработку полученных результатов проводили по общепринятым методам [2]. Оценку диагностических параметров тест-системы осуществляли по методике, предложенной ВОЗ [ 1 ]: • чувствительность тест-системы-количество лиц с хронической ал­когольной интоксикацией (в о), у которых титр антител к белкам, струк­турно измененным под воздействием ацетальдегида, равняется условно-диагностическому значению или превышает его; • специфичность тест-системы - количество умеренно пьющих лю­дей (в <//о ) с титрами специфических антител ниже условно-диагности­ческого значения; • индекс «диагностической эффективности» (ДЭ) определяется исхо­дя из форм у л ы:ДЭ P+HXlOO Где PS - количество лиц с хронической алкогольной интоксикацией, у которых антитела к белкам, структурно измененным под воздействием ацетальдегида, регистрируются в условно-диагностическом или более вы­соком титре; NH-количество умеренно пьющих людей с титрами специфических антител ниже условно-диагностического значения; S -+- Н - количество обследованных лиц в обеих группах. Как и предполагалось, у больных с хронической алкогольной инток­сикацией антитела к белкам, структурно измененным под воздействием ацетальдегида, регистрировались в более высоких титрах, чем у лиц с неустановленным алкогольным анамнезом (таблица 2). В частности, у лиц, умеренно пьющих, специфические антитела выявлялись преимуще-ственно в титрах, соответствующих 16—32 (в 45 случаев), и не превы - шали 128.

Аналогичное распределение титров обнаруживалось» и при обследовании лиц. с различными заболеваниями неалкогольного генеза (больных опийной наркоманией или вирусным гепатитом В или С, кар­диологических и иммунологических больных, лиц с заболеваниями пе­чени и ЖВП). Ни у одного из обследованных, вошедших в группу «отри­цательного» контроля, титры иммуноглобулинов класса А к белкам, структурно измененным под воздействием ацетальдегида, не поднимались выше 16.

При этом у 58 <> больных алкоголизмом специфические антите­ла регистрировались в титрах 64— 1 28, а у 13 <//о обследованных этой груп­пы обнаруживались даже более высокие значения (256—512). Интересно, что уровень антител к белкам, структурно измененным под воздействием ацетальдегида, выявляемый у больных алкоголизмом, не обнаруживал никакой зависимости от суточной алкогольной толеран­тности, наследственной отягощенности и биохимических показателей крови (концентрации холестерина, Р-липопротеидов, билирубина, Таблица 2 Уровень иммуноглобулинов класса А к структурно измененньжм: белкам, выявляемый в разл ичнж>жх группах обе л е дованнж>жх Лиц С помощью иммуноферментного анализа

Обследуемые группы П Средние значения титоов Достоверность (р<) при сравнении с группой
В -log2 Абсолютное значение Умеренно Но пьющих лиц Больных алкоголизмо м
Умеренно пьющие Лица 71 3,9 ± 0,2 14,9 0,001
«Отрицательный» ко нтооль Ю 2,3 ± 0,3 4,9 0,001
Больные алкоголизмом 120 6,2 ± 0,1 78,8 0,001
Больные опийной наркоманией 49 3,0 ± 0,2 8 Н. д. 0,001
Кардиологические больные 35 3,6 Zfc О 12,1 Н. Д. 0,001
Иммунологические больные 23 3,3 ± 0,4 9,8 Н. Д. 0,001
Лица с заболеваниями 1 1 4,5 ± 0,3 22,6 И.Д. 0,001
Больные вирусным гепатитом В или С 17 3,9 Ь 0,3 14,9 Н. д. 0,001

аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и тимоловой про­бы). По-видимому, иммунологические показатели, выявляемые в сыворот­ках крови больных алкоголизмом, следует рассматривать» как самостоя­тельный диагностический критерий хронической алкогольной интоксикации, который не зависит от особенностей алкогольного анам­неза больного, что в значительной степени п о в ы ixi а е т диагностическую ценность примененного подхода. Чтобы использовать предлагаемую тест-систему иммуноферментного анализа для диагностических целей, была определена величина условно-диагностического титра, которая соответствовала 64 (6,0 — log2). Ори выборе этого значения мы руководствовались следующими соображения­ми. Во-первых, у лиц, умеренно пьющих, антитела к белкам, структурно измененным под воздействием ацетал ьде гида, в основном обнаруживались в более низких титрах, и только у 1 7 <о обследованных регистрировались в титрах 64—1 28. Рт во-вторых, при разведении сывороток крови больных с хронической алкогольной интоксикацией в 64 раза (таблица 1) еще сохраняется достоверное различие оптической плотности, обнаруживае­мой при выявлении антител к модифицированному ацетальдегидом и не­мо ди фи цирован ному альбумину.

Исходя из полученного значения условно-диагностического титра, в злоупотреблении спиртными напитками можно было заподозрить 8— 1 8 обследованных из групп с неустановленным алкогольным анамнезом (таб­лица 3), причем наличие заболеваний печени, сердца или иммунной сис­темы не вл и ял о на частоту выя в л е н и я диагностически значимых титров специфических антител. Вполне закономерно, что повыьыенные титры ан­тител к структурно измененным белкам у больных алкоголизмом регист­рировались достоверно чаще, чем во всех прочих группах (в 71 случаев), и совсем не обнаруживались у лиц, не употреблявших алкоголь по крайней мере в течение одного месяца и вошедших в группу «отрицательного» кон-троля.

Таким образом, чувствительность, специфичность и диагностическая эф­фективность тест-системы для выявления хронической алкогольной интоксикации по уровню антител к белкам, структурно измененным под воз­действием ацетал ьде гида, обнаруживаемым с помощью иммуноферментного анализа, соответственно равны 71, 83 и 76 С//о, что позволяет говорить о реальной возможности использования ее для диагностических целей. Итак, мы показали, что у 71 /"о больных алкоголизмом антитела к бел­кам, структурно измененным под воздействием ацетал ьде гида, обнаружи­ваются в диагностически значимых титрах. Чтобы ответить на вопрос о том, почему остальные 29 больных являются серонегативными, был проведен дополнительный анализ полученных результатов (таблица 4). Таблица 3 Частота выявления (в ) диагностически значимых титров иммуноглобулинов класса А к структурно измененным белкам в обследованных группах

Уме­ренно пью­щие (я 71) «Отрица­тельный» контроль (л 10) Больные Алого-лизмом (я 119) Боль­ные опийной Нарко­манией (п 49) Кардио­логичес­кие больные (и 35) Иммуно­логичес­кие больные (п 23) Лица с заболева­ниями ЖВП (я 11) Больные вирус­ным гепатито МВ или С (п 23)
17 0 71 8 14 13 18 17

лица, не употреблявшие алкоголь по крайней мере в течение одного месяца. достоверное различие при сравнении с аналогичным показателем у лиц, умерен­но пьющих (р < 0,001). Из обследованных больных алкоголизмом было сформировано 5 групп, различавшихся между собой по стажу хронической алкогольной инток­сикации: с длительностью злоупотребления алкоголем не более 5 лет, 6-10 лет, 11-15 лет, 16-20 лет и более 20 лет.

Было установлено, что по мере увеличения длительности злоупотребления спиртными напитками частота выявления диагностически значимых титров антител к структур­но измененным белкам постепенно снижается, и при обследовании лиц, злоупотреблявших спиртными напитками более 20 лет, хроническую ал­когольную интоксикацию удавалось выявить лишь в 57 случаев. В то же время у 9 больных, злоупотреблявших алкоголем свыше 15 лет, специфические антитела регистрировались в титрах 512-1024, тогда как у других обследованных это значение не превышало 256. В результате средний уровень антител к модифицированному ацетальдегидом альбуми­ну, выявляемый в группах с различным стажем хронической алкогольной интоксикации, практически не менялся, достоверно отличаясь при этом от аналогичного показателя у лиц, умеренно пьющих.

Результаты обследования больных алкоголизмом были также проана­лизированы с учетом давности существования алкогольного абстинентного синдрома (таблица 5). Оказалось, что у больных с более высокими титра­ми антител к структурно измененным белкам (512-1024) алкогольный абстинентный синдром сформировался не более 15 лет назад, тогда как при обследовании больных двух последних групп (с длительностью суще­ствования абстинентного синдрома в течение 16-20 и более 20 лет) зна­чения выявляемых титров не превышали 128.

Соответственно снижались и среднегрупповые титры, а также частота выявления лице хронической алкогольной интоксикацией. Таким образом становится очевидным, что эффективность применения иммуноферментного анализа для диагностики хронической алкогольной интоксикации по уровню антител к белкам, структурно измененным под воздействием ацетальдегида, в значительной степени зависит от стажа зло­употребления алкоголем и давности сформировавшегося алкогольного аб­стинентного синдрома. Вместе с тем нельзя не заметить, что для выявления многолетнего пьянства вряд ли необходимо прибегать к каким-либо специ­альным лабораторным методам обследования: физиологические наруше­ния и социальная деградация личности позволят безошибочно поставить диагноз.

Другое дело, когда последствия злоупотребления спиртными на­питками еще не так очевидны. В этом случае объективное обследование и, в частности, разработанная тест-система иммуноферментного анализа, об­ладающая высокими диагностическими характеристиками, может оказать­ся весьма полезной. И наконец, нами было обследовано 16 больных алкоголизмом, про­ходивших курс лечения в клинике НИИ наркологии, у которых прово­дился 2-6 кратный забор крови, что позволило нам изучить динамику антител к структурно измененным белкам в течение 35 дней.

Из этих больных были сформированы группы, различавшиеся между собой по длительности воздержания от алкоголя: 0-1день, 2-7 дней, 8-15, 16-21,22-28 и 28-35 дней. Полученные среднегрупповые титры анти­тел к белкам, структурно измененным воздействием ацетальдегида, срав­нивали с уровнем специфических антител, выявляемых у этих же боль­ных в первые сутки безалкогольного периода, а также с уровнем антител у лиц, умеренно пьющих.

Как видно из Таблицы 6, Уже через 2-3 недели после последнего упот­ребления алкоголя титры антител к структурно измененным белкам у боль­ных с хронической алкогольной интоксикацией достоверно снижаются и уже практически не отличаются от аналогичного показателя у лиц, умерен­но пьющих людей. Вместе с тем необходимо учитывать, что на такую быст­рую нормализацию уровня специфических антител в данном случае оказы­вает влияние не только и, скорее всего, не столько воздержание от употребления алкоголя, сколько лечение, в частности дезинтоксикацион-ное, получаемое больными алкоголизмом в стационаре. Мы полагаем, что при отсутствии лечения скорость выведения этанола и продуктов его мета­болизма из организма уменьшится, и, следовательно, увеличится период эффективного использования метода для иммунодиагностики хронической алкогольной интоксикации.

Таблица 6 Влияние длительности воздержания от алкоголя в сочетании с лечением, проводимым в условиях стационара, на уровень иммуноглобулинов класса А К структурно измененным белкам, выявляемый с помощью иммуноферментного анализа у больных Алкоголизмом

Длитель­ность воздержания от алкоголя (дней) Диапа­зон 0-1 2-7 8-14 15-21 22-28 29-35
В Среднем 0,3 + 0,1 4,2 ±0,9 11,2 ±0,7 18,5 ±0,6 25,8 ±1,2 32,5 ± 1,2
П (чел.) 14 9 14 12 7 4
Средний титр антител (-1ое2) 6jO±Q4 5,3 ± 0,3 5,0 ±0,3 4,4 ±0,3 4,0 ±0,3 3,5 ±0,2
Кол-во лиц (в)с диагностическими титрами антител 54 56 21 17 0 0

Достоверное различие при сравнении с аналогичным показателем у, лиц, умеренно пьющих р < 0,05. Достоверное различие р < 0,01. Достоверное различие р < 0,001.

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МЕТОДА

Антитела к белкам, структурно измененным воздействием ацетальде-гида, определяемые в сыворотках крови, являются самостоятельным ди­агностическим показателем при выявлении хронической алкогольной ин­токсикации. Поэтому предлагаемый вариант иммуноферментного анализа позволяет в значительной степени усовершенствовать диагностику хро­нической алкогольной интоксикации, особенно при сравнительно неболь­шом ее стаже (менее 5 лет). Метод может быть использован как в целях коррекции лечения различных заболеваний, связанных со злоупотребле­нием алкоголя, так и для выявления лиц, злоупотребляющих спиртными напитками, при трудовом найме.

Похожие записи:

Категории: