Метод анализа частоты встречаемости аллелей и генотипов в популяции

Метод анализа частоты встречаемости аллелей и генотипов в популяции предусматривает наличие: 1 ) Стандартного набора реактивов для выделения ДНК из крови 2) Прибора (амплификатора) и набора реактивов (синтетические оли-гонуклеотидные праймеры, дезоксирибонуклеотиды, ДНК-полимераза, буфер) для проведения по л име разной цепной реакции. 3) Прибора и набора реактивов для электрофореза ДНК 4) Трансиллюминатора для идентификации фрагментов ДНК. Для изучения кругооборота нейромедиаторов из группы катехо л ами­нов по показателям крови и мочи необходим высокоэффективный хрома­тограф с электрохимическим дефектом, для определения активности дофаминбетагидроксилазы (ДБГ) - спектрофотометр, а для определе­ния активности моноаминоксидазы - радиометрическое оборудование. Изучение выявленных слуховых электрических потенциалов мозга требует соответствующего электрофизиологического оборудования (мно­гофункциональный прибор Viking IV - США и др.

Клинические исследования

Обследовано 274 больных алкоголизмом и опийной наркоманией, 70 здоровых лиц, и бО подростков в возрасте 16—17 Лет с наследственной отягощенностью алкоголизмом по линии отца и без таковой. Все больные были разделены на 2 группы: 1 . Больные из семей, отягощенных алкоголизмом или злоупотребле­нием других ПАВ (не менее 2-х кровных родственников злоупотребляли ПАВ).

2. Больные из семей, не отягощенных алкоголизмом или злоупотреб­лениями других ПАВ. У всех больных оценивались: а) тяжесть и длительность заболевания; б) психоэмоциональный статус и анамнез; в) сопутствующие заболевания.

Для оценки психоэмоционального статуса и анамнеза использовались клинико-психиатрический и клинико-психологический методы. В качестве контроля исследованы здоровые лица, не злоупотребляю­щие ПАВ.

Выделение ДНК и генотипирование

ДНК выделяли из клеток цельной крови методом фенол-хлороформ­ной экстракции. Для выявления конкретных аллелей изучаемых генов использовали метод генотипического анализа ДНК с использованием олигонуклеотид-ных праймеров в условиях полимеразной цепной реакции (PCR). Тандемный повтор с размером повторяющейся единицы 48 пар нук-леотидов в экзоне 3 гена дофаминового рецептора 4-го типа (DRD4) был типирован с праймерами согласно условиям полимеразной цепной реак­ции и электрофореза, описанным Chang F. M. с соавторами [22]. Тандемный повтор с размером повторяющейся единицы 40 пар нук-леотидов в 3' не транслируемой области гена, кодирующего дофаминт-ранспортный белок (DAT), был типирован согласно условиям, описан­ным Sano... с соавторами [ ]. Статистическая обработка данных проводилась с применением критерия 2.

Нейрохимические исследования

В плазме крови и моче методом высокоэффективной жидкостной хро­матографии определялась концентрация свободных и коньюгированных форм дофамина (ДА) и норадреналина (ПА), а также содержание их пред­шественника в синтезе - диоксифенилаланина (ДОФА) и продукта мета­болизма - диоксифенилуксусной кислоты (ДОФУК). Активность фер­мента, контролирующего синтез ПА и ДА - дофаминбетагидроксилазы (ДБГ), изучалась спектрофотометрическим методом, а активность фер - мента, контролирующего дезаминирование ДА и НА - моноаминоксида - зы (МАО), - радиометрическим методом. Активность ДБГ изучалась в период посттерапевтической ремиссии (через Ю-12 месяцев после выписки из стационара при условии строгого воздержания от приема алкогольных напитков).

Категории: